引物合成仪

　　合成步骤：

　　1、脱掉附加在CPG担体上的金蝴蝶个碱基5' -OH基团上的保护基 (DMTr)，准备附加下一个新的碱基；

　　2、活化新的碱基单体，准备与金蝴蝶个碱基进行反应；

　　3、第二个碱基与金蝴蝶个碱基发生偶联反应；

　　4、将没有反应的金蝴蝶个碱基的5' -OH加帽封死 ，使其不再进一步参与反应；

　　5、将核苷亚磷酸酯氧化成更稳定的核苷磷酸酯 (即将三价磷氧化成五价磷)。

　　6、重复进行1～5的循环，直至合成完所需的Oligo DNA序列。

　　7、合成结束后，将Oligo DNA分子从CPG上切下，再进行进一步的纯化。

　　引物合成仪溶解和保存引物的方式：

　　干燥后的引物质地非常疏松，开盖前【金蝴蝶】好离心一下，或管垂直向上在桌面上敲敲，将引物粉末收集到管底。根据计算出的体积加入去离子无菌水或 10mM Tris pH7.5 缓冲液，室温放置几分钟，振荡助溶，离心将溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸馏水，因为有些蒸馏水的 pH 值比较低（ pH4-5 ） , 引物在这种条件下不稳定。

　　引物合成后，经过一系列处理和纯化步骤，旋转干燥而成片状物质。引物在溶解前，室温状态下可以长期保存。溶解后的引物 -20 度可以长期保存。如果对实验的重复性要求较高，合成的 OD 数较大，建议分装，避免反复冻融。修饰荧光引物需要避光保存。

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